《表1 引物序列：糖原合成激酶3β抑制剂通过p38负调节感染性炎性反应的研究》

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《糖原合成激酶3β抑制剂通过p38负调节感染性炎性反应的研究》

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RNA抽提试剂法进行RNA提取，分光光度计测RNA浓度和纯度，用于下一步实验。将提取后的RNA（1μg）转录为cDNA，详细步骤如下：RNA 1μg，oligo(dT）1μL，补DEPC水至体积12μL，混匀；65℃，5 min；每孔加入5×反应液4μL，20U/μL RNA酶抑制剂1μL，10 mmol/L dNTP2μL，200U/μL反转录酶1μL，至总体积20μL，混匀；42℃，60min，70℃，5min终止反应。反转录的cDNA保存备用。应用SYBR Green试剂盒进行扩增，详述如下：SYBR Green（2×）10μL，引物上下游混合液（5μmol/L）1.6μL，cDNA模板2μL，灭菌H2O补齐总体积20μL充分混匀；按照两步法PCR扩增程序，第1步，95℃30s，1个循环；第2步，95℃5s，60℃30s，40个循环PCR反应。反应结束后确认qPCR的扩增曲线和溶解曲线，得到循环阈值（Ct）值，采用2-ΔΔCT法进行相对定量。IL-10、IL-6和β-actin的引物序列见表1。