《表1 引物序列:Eryxin通过抑制芳香化酶表达调控雌激素生物合成》

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《Eryxin通过抑制芳香化酶表达调控雌激素生物合成》


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将对数生长期的KGN细胞接种于6孔板,培养过夜后,更换新鲜培养基,然后加入不同浓度的eryxin(10、50、100μg/mL)以及DMSO,10μmol/L的福斯克林(FSK)作为对照,继续培养24 h后,采用TRIzol法提取细胞总RNA.取2μg总RNA以oligo(dT)18作为引物,用M-MLV逆转录酶进行c DNA的合成.然后使用SYBR GreenⅠ,进行Real time PCR.反应程序:95℃15 s;95℃5 s,55℃15 s,40个循环;72℃15 s.每个样品分别使用GAPDH作为内参基因,通过2^-ΔΔCT分析芳香化酶基因以及启动子PromoterⅡ表达水平的变化.检测中使用的引物序列见表1.