《表1 96孔板加样量：布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究》

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《布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究》

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将诱导后的破骨细胞同样设置Si、NC和MOCK组，分别测定BTK-siRNA转染前（0 h）和转染24、48 h后破骨细胞TRAP酶活性。在96孔板中接种各组细胞悬液，每孔100μL，置于37℃、5%CO2培养箱中预培养24 h，观察细胞状态和密度，之后进行转染，转染方法同1.4，加入转染试剂4～6 h更换正常培养液后，继续培养24、48 h，收集各组样本，参照TRAP检测试剂盒（PNP微板法）说明书配置显色工作液和标准品工作液，按照表1在96孔板内加样，设置空白对照组、标准孔组、待测样品组，标准品的用量为4、8、16、24、32、40μL，轻轻混匀后，37℃孵育30 min，每孔加入160μL Stopping Solution终止反应，采用酶标仪测定各组细胞在450 nm处的OD值，OD值越高代表酶活性越高。