《表1 引物序列：不同代数SD大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖和成骨分化能力的实验研究》

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《不同代数SD大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖和成骨分化能力的实验研究》

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分别取P1、P3、P5、P7、P9代BMSCs以5×104个/孔的密度接种于6孔板中，培养24 h后更换成骨诱导液。矿化诱导14 d后，弃上清液，PBS冲洗3次，每次5 min。每孔加入1 m L TRIzol试剂，冰上放置15 min，提取细胞的总RNA。按照逆转录试剂盒说明书操作，将总RNA逆转录为c DNA。应用RT-PCR检测成骨标志物Ⅰ型胶原A1(COL1A1）和骨钙素（OCN）的基因表达，引物序列见表1。反应条件为95℃变性5 s，55℃退火15 s，72℃延伸10 s，共40个循环。使用2-△△CT法进行相对定向量计算。