《表1 引物序列:SRT1720抗老年大鼠骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究》

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《SRT1720抗老年大鼠骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究》


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采用荧光定量PCR法。以Trizol法提取RNA,按照说明书进行操作,沉淀的RNA溶解于20μl DEPC水,用Nanodrop分光光度计检测RNA浓度。参照说明书以逆转录试剂盒进行逆转录,得到的cDNA存放于-20℃备用。应用荧光定量PCR法检测目的基因表达。以GAPDH为内参,以逆转录而来的cDNA为模板,按照SYBR Green Reaction Mix试剂盒说明添加反应体系,在ABI 7500Fast系统上检测基因表达强度。反应体系为20μl(含SYBR Green 10μl,Rox 0.4μl,cDNA 2μl,ddH2O 6.8μl,Primer F 0.4μl和Primer R 0.4μl),反应条件为95℃预热15min,随后95℃解链5s,62℃反应30s,72℃延长5s,40个循环。引物序列用Primer 3在线软件设计,由Invitrogen公司上海引物合成部合成,见表1。基因相对表达丰度用ΔΔCt法计算分析。