《表1 引物序列：马的骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞和成骨细胞及其鉴定》

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《马的骨髓间充质干细胞诱导为软骨细胞和成骨细胞及其鉴定》

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取生长良好的P3代细胞，用Trizol裂解液方法（TaKaRa）提取总RNA，并根据TaKaRa公司反转录试剂盒说明反转录成c DNA。根据NCBI上公布的马科动物的m RNA基因序列，用Primer premier 5.0软件设计引物，引物序列见表1。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。PCR反应体系为20μl:cDNA 2μl（100 mg/L），Ex Taq 2μl，上、下游引物各1μl（10 mg/L），dd H2O补足。PCR反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，退火（退火温度见表1)30 s，72℃延伸30 s，30个循环；72℃后延伸5 min；4℃保存。PCR扩增产物用琼脂糖凝胶电泳检测骨髓间充质干细胞的干细胞转录因子Nanog基因以及特异性表面标记CD44、CD90和CD105的表达，以及诱导的软骨细胞分子因子鉴定，包括特异基因collagenⅡ、aggrecan和Sox9的表达情况。