《表1 引物设计：煅烧骨/壳聚糖复合材料促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化》

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《煅烧骨/壳聚糖复合材料促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化》

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分别在成骨诱导1，2，3周时收集样本，提取总RNA，使用Takara Prime Script?RT reagent Kit With g DNA Eraser反转录试剂盒在Bio Rad 1000TMThermal Cycler上进行反转录，获得c DNA。利用primer 6.0生物软件，根据SD大鼠的相对基因m RNA序列设计引物，选择GAPDH基因作为内参，引物由Takara公司合成。引物设计见表1。根据反应体系在ABI 7300上进行实时荧光定量PCR，采用两步法PCR扩增标准程序，反应程序如下：95.0℃30 min；95.0℃5 min，56.0℃30 min，重复39个循环；95.0℃15 min；熔解曲线65℃至95℃，扩增0.5℃5 min。所有样本重复检测3次以减少测量误差。基因表达情况按以下公式计算[17]：目的基因表达量=2-ΔΔCt。ΔΔCt=实验组ΔCt-对照组ΔCt，ΔCt=目的基因Ct-内参基因Ct。