《表1 基因引物序列：唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用研究》

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《唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用研究》

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选取BMSCs成骨相关基因ALP、骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein-2，BMP-2）、Ⅰ型胶原酶（typeⅠcollagenase，COL-Ⅰ）、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor-2，Runx-2）、锌指结构转录因子（zinc finger structure transcription factor，Osx）、骨钙蛋白（osteocalcin，OCN）、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）基因，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase，GAPHD）为内参进行q RT-PCR检测。取对数生长期、状态优良的第3代BMSCs，制备成约5.0×104个·mL-1的单细胞悬液，各取2 mL接种于6孔板，培养24 h后分别更换为唑来膦酸浓度1、5、10、20μmol·L-1的成骨诱导培养基和对照组成骨诱导培养基。作用7 d后，吸去孔板中培养基，PBS清洗2次，加入裂解液500μL，5 min后收集各样本于无酶EP管，按照TakaraTotal RNA提取试剂盒提取总RNA。使用核酸蛋白分析仪检测A260nm/A280nm的比值以及RNA含量确定其纯度。再按照PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA Eraser说明进行反转录，通过所得cDNA完成PCR反应。最后，用2-ΔΔCT统计学方法分析结果。基因引物序列见表1。