《表1 vps4b gDNA基因型鉴定的PCR引物》

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《牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达》

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PCR扩增引物由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合成，聚丙烯酰胺凝胶纯化后-20℃备用。PCR扩增反应体系根据使用说明，按25μL反应体系进行扩增，dNTP0.5μL、待测gDNA 0.5μL、正向以及反向引物各0.5μL、10×Taq buffer 2.5μL、Taq酶0.5μL，加dd H2O20μL后混匀，离心数秒，放入PCR仪进行扩增。vps4b gDNA基因型鉴定的PCR引物见表1。PCR反应循环设置:vps4b-1为94℃预变性5 min，94℃30 s、60℃30 s、72℃1 min，循环数为35次，最后72℃延伸10 min，4℃保存。vps4b-2为降落PCR程序，95℃预变性5 min，95℃30 s、（65℃-0.5℃）30 s、72℃30 s，循环数为20次；接着95℃30 s、55℃30 s、72℃30 s，循环数为20次，然后72℃延伸10 min，16℃保存。取5μL PCR产物和2 000 bp DNAmarker，进行1%琼脂糖凝胶电泳，并用凝胶成像分析仪进行分析。