《表1 人乙酰胆碱酯酶基因克隆、测序及菌落PCR鉴定所用的引物序列》

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《重组人乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中分泌表达及其对农药的敏感性评估》

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根据GenBank公布的人乙酰胆碱酯酶基因序列（NM＿000665.4）设计引物F1和R1（表1）。以pReceiver-M02-hAChE-ORF质粒为模板，以特异性引物F1和R1进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）。PCR反应体系（50μL）如下:5×PCR缓冲液10μL，dNTP混合物（2.5 mmol/L）8μL，引物F1（10μmol/L）0.5μL，引物R1（10μmol/L）0.5μL，模板0.5μL，TaKaRa PrimeSTAR HS DNA聚合酶（2.5 U/μL）0.5μL，ddH2O 30μL。PCR条件:95℃预变性5 min；95℃变性30 s，65.1℃退火1 min，72℃延伸3 min，31个循环；最后，72℃延伸10 min。将PCR产物纯化后待用。