《表1 Vt HSFB2b基因克隆及q RT-PCR分析所用引物序列》

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《三色堇热激转录因子基因VtHSFB2b的克隆及表达分析》

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根据转录组已得到的部分保守序列，利用Primer5.0设计特异引物HSFA2b-F和HSFA2b-R（表1)。PCR扩增体系为20μL，反应体系组分如：c DNA模板约为100 ng，Taq DNA聚合酶0.3μL，10×PCR Buffer 2μL，d NTP mixture （2.5 mmol/L）1.6μL，引物(10μmol/L）各0.6μL，最后无菌水补至20μL。PCR反应条件：94℃预变性1 min；94℃变性30 s，55℃退火1 min，72℃延伸2 min，循环反应为35个。1%琼脂糖凝胶电泳检测后进行胶回收（Ta Ka Ra；Code 9762），构建载体，后转化于大肠杆菌DH5α中，经蓝白斑筛选后，挑取重组质粒摇菌，经PCR经鉴定后，将阳性菌液送至公司测序。