《表1 小鼠基因型鉴定PCR反应体系》

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《线粒体分裂蛋白1在安静状态下和力竭运动中对骨骼肌线粒体质量的调控作用》

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在小鼠出生后约3周，使用异氟烷（isoflurane）混合氧气麻醉小鼠，对小鼠进行剪尾（约2 mm）和耳朵编号，使用加有蛋白酶K的直接PCR细胞溶解试剂（Direct PCR Lysis Reagent（Mouse Tail），VIAGEN，102-T）溶解鼠尾，每个样品加入该试剂300μL。55℃孵育过夜。第2天调整温度至85℃，孵育30min，随后保存于-20℃备用。正式检测前溶解样品进行加样（表1），双酶切位点的目标基因序列NDEL引物：5'-GCC GTA TCC CAG ACC ATT CAG GAG-3'，5'-GGT CAT GGT CCT GGA CCT CCA TTA C-3'；Cre引物：5'-ATT TGC CTG CAT TAC CGGTC-3'，5'-ATC AAC GTT TTC TTT TCG G-3'。加样完成后通过PCR进行扩增：94℃2 min预变性，94℃30 s变性，60℃30 s退火，72℃1 min/kb延伸，从变性到1 min/kb延伸共30个循环，72℃5 min延伸，4℃无限孵育。称量1.5 g琼脂糖溶于100 m L的1×TAE溶液（Invitrogen）溶解（1.5%浓度），微波炉加热直至琼脂糖完全溶解，待凝胶稍微冷却加入10μL的Goldview核酸染料（Coolaber，SL2140-1 m L），混匀后倒入制胶架中加上梳子冷却至完全凝固，移至电泳槽中，加入足量1×TAE溶液，拔掉梳子加入经PCR扩增后的样品。调整电压100 V，电泳15～20 min。电泳完毕后，使用Bio-Rad(Chemidoc Imager System）凝胶成像系统软件拍照并进行基因型鉴定（图1）。