《表1 基因引物序列：调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症大鼠肠上皮细胞occludin和ZO-1蛋白表达的影响》

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《调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症大鼠肠上皮细胞occludin和ZO-1蛋白表达的影响》

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取各组大鼠同一位置的小肠50 mg、肝脏100 mg，分别提取总RNA，用核酸蛋白测定仪测定吸光度D（260 nm）/D（280 nm）比值，分别计算出小肠和肝脏的RNA浓度和纯度。反转录的操作按照Invitrogen公司M-MLV First Strand Kit提供的20μL反应体系进行。先加入3μg总RNA，与Random Hexamer Primer、ddH2O配制成12μL液体，70℃反应5 min，室温静置2 min；随后加入含有Transcriptase的缓冲液8μL，42℃反应60 min，94℃反应5 min，合成第一链cDNA。根据GenBank提供的基因序列设计特异性引物，利用Primer 5.0和Beacon Designer 7.91生物软件设计引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列见表1。基因表达的检测按照25μL的反应体系来添加，具体为先加入9.5μL的ddH2O，而后分别加入1μL的上游、下游引物，随后继续加入1μL的cDNA以及12.5μL Maxima SYBR Green/Fluorescein qPCR Master（2×）的混合物，最后放入荧光定量PCR仪进行反应。扩增步骤1:94℃×5min；步骤2:94℃×30 s→55℃×30 s→72℃×50 s（45个循环）；步骤3:72℃×7 min。每组10个样品，分别取1μL作为cNDA模板扩增，运用2-△△Ct法计算各组基因相对表达量。具体计算公式为: