《表1 PCR引物序列:N-乙酰半胱氨酸对AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞纤维化相关蛋白表达的影响》

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《N-乙酰半胱氨酸对AngⅡ诱导的肾小管上皮细胞纤维化相关蛋白表达的影响》


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按分组用NAC(5mmol/L)、AngⅡ(1 mmol/L)干预HK2细胞48 h后,PBS洗2次。加入0.5 ml Trizol,吹打后集至EP管,加0.1 ml氯仿,冰浴10 min。4℃,12 000 r/min,离心15 min,集上清液至新EP管。加等体积异丙醇,静置10 min。4℃,12 000 r/min,离心10 min,弃上清液。1 ml 75%乙醇洗涤沉淀,4℃,7 500 r/min,离心5 min,弃上清液,重复1次。干燥后,加适量DEPC水溶解。测RNA浓度,制备cDNA,参照逆转录试剂盒说明书,配置10μl PCR反应体系,于荧光定量PCR仪中进行检测,2-△△CT法计算其相对表达量。所用引物序列见表1。