《表1 引物序列：野生大豆类受体蛋白激酶基因GsCBRLK超量表达提高水稻耐盐碱性》

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《野生大豆类受体蛋白激酶基因GsCBRLK超量表达提高水稻耐盐碱性》

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根据Gs CBRLK基因CDS区序列设计USER克隆（Nour-Eldin等2006）引物（表1），以前期获得的p CAMBIA1302-Gs CBRLK质粒为模板进行PCR扩增。PCR反应体系15μL:2×Easy Taq PCR Super Mix 7.5μL，上游引物和下游引物（10μmol·L-1）各0.3μL，dd H2O 4.9μL以及质粒p CAMBIA1302-Gs CBRLK 2μL。PCR反应条件:95°C预变性5min；95°C变性30 s，60°C退火30 s，72°C延伸30 s，30个循环；72°C终延伸10 min。扩增产物纯化后，与Pac I及Nt.Bbv CI消化的p CAMBIA130035SU片段连接，连接体系10μL:USER酶1μL，10×Buffer 1μL，消化后的p CAMBIA130035SU 2μL以及纯化后的Gs CBRLK PCR产物6μL。连接条件:37°C 20min，25°C 20 min。连接产物转化大肠杆菌DH5α，PCR鉴定阳性菌落后送交测序。利用冻融法将p C-35SU-Gs CBRLK重组载体转化农杆菌EHA105，PCR检测获得阳性克隆。