《表1 引物序列：大珠母贝胰岛素相关肽受体基因的克隆与表达》

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《大珠母贝胰岛素相关肽受体基因的克隆与表达》

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根据大珠母贝转录组数据库中IRR的unigene序列设计基因特异性引物，将该基因中间分为三段克隆。PCR扩增产物通过10g/L的琼脂糖凝胶电泳检测，并用纯化回收试剂盒对目的片段进行纯化回收。目的片段通过PDM-19T载体连接，然后转入DH5a感受态细胞中。通过LA（含氨苄青霉素Amp+）固体平板筛选出阳性菌落，挑选单克隆[14]，送至广州生工生物工程有限公司测序。利用5′端和3′端巢式引物进行扩增。目的片段的回收、转化、测序等方法同Pm IRR基因中间片段，然后将5′端和3′端拼接获得Pm IRR全长序列（表1）。