《表1 波纹唇鱼雄激素受体基因克隆和表达所用的引物》

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《波纹唇鱼雄激素受体基因的克隆与表达分析》

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取1μg的性腺RNA，使用反转录试剂盒合成cDNA。根据波纹唇鱼雄激素受体基因的转录组序列，用Primer 5.0软件设计中间片段的引物armid-F和ar-mid-R（表1）。以性腺cDNA为模板进行PCR扩增。反应体系为:10×Buffer 2μL，dNTP 2μL，cDNA 1μL，Taq DNA polymerase 0.2μL，ddH2O 12.8μL，正反引物各1μL。反应程序为:94℃预变性3min；94℃30s，56℃30s，72℃2min，共35个循环；72℃10min。纯化目的片段、连接到PGEM-T载体，转染大肠杆菌（Escherichia coli）感受态细胞，菌液涂布于LB固体培养基上12h后挑菌，验证，测序，于美国国立生物技术信息中心网站上比对。