《表2 实时荧光定量RT-PCR引物》

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《短双歧杆菌对鼠伤寒沙门氏菌的抑制》

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用试剂盒提取不同处理下的鼠伤寒沙门氏菌总RNA，用DNase去除污染的基因组DNA。将总RNA逆转录合成c DNA。逆转录体系:总RNA 1μg，Oligo dT 1μL，5×Buffer4μL，dNTPs（10 mmol/L）2μL，RNase Inhibitor 1μL，ReverTraAce 1μL，用ddH2O补足至20μL。逆转录条件:65°C 5 min；37°C 15 min；98°C 5 min。将RNA和逆转录的c DNA分别于-80°C和-20°C保存备用。采用荧光定量PCR方法通过特异性引物来检测S.typhimurium SPI-1相关基因的表达量，其中引物由Premier 5.0软件设计，由华大基因合成（引物序列见表2）。PCR反应体系:cDNA 1μL，SYBR PremixExTaq（2×）7.5μL，正、反向引物（0.5μmol/L）各0.3μL，ddH2O5.9μL。以S.typhimurium的16S rRNA基因作为内参，PCR反应条件:95°C 10 min；95°C 30 s，54°C 30 s，72°C 30 s，循环40次。通过2-ΔΔCt方法对数据进行处理，确定基因的相对表达量。