《表4 实时定量RT-PCR引物序列》

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《北美鹅掌楸淹水胁迫转录因子的鉴定及表达分析》

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挑选AP2-ERF、MYB、WRKY、b HLH等4个转录因子基因，在淹水胁迫0，2 d，4 d，6 d 4个时间点对淹水敏感无性系和耐淹无性系叶片进行q RT-PCR分析。利用Trizol试剂提取北美鹅掌楸叶片总RNA，Prime ScriptTM1stStrand c DNA Synthesis Kit （Ta Ka Ra）反转录。选择组蛋白H3基因作为内参基因，利用Primer Express Software version 3.0 （Applied Biosystems）设计扩增引物序列（表4）。利用SYBR Green Realtime PCR Master Mix （TOYOBO）在ABI 7900 Real time PCR Systems （Applied Biosystems）上进实时定量PCR分析。反应体系20μL：模板c DNA 3.0μL，上下游引物分别为1.0μL，SYBR誖Real PCR Master Mix 10.0μL，dd H2O 5.0μL。扩增反应程序为：95℃1 min；95℃15 s，60℃1 min，40个循环。取3个平行样品校正后利用2-△△Ct计算基因相对表达量。