《表4 实时荧光定量PCR反应引物序列及程序》

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《某市污水厂抗生素和抗生素抗性基因的分布特征》

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（3）定量PCR（q PCR）检测采用SYBR GreenⅠ方法，使用实时荧光定量PCR仪（BioRad CFX96Touch，US）对各目标基因进行定量，q PCR采用20μL体系[14]，反应程序如表4所示．测定时，将标准质粒以10倍梯度稀释，根据质粒浓度计算得到标准质粒的拷贝数，与通过实时荧光定量PCR测定得到的Ct值绘制标准曲线，标准质粒的构建方法参照文献[19]的方法．各目标基因标准曲线的线性相关系数范围为0.990～0.996．每个样品设置3个平行样．