《表2 实时荧光定量PCR所使用引物》

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《黑曲霉菌株柠檬酸合成酶基因的敲除及功能分析》

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实时荧光定量PCR的相关基因的参考序列在GenBank登录号为：己糖激酶XM＿001400532，磷酸果糖激酶X M＿0 0 1 3 9 8 5 8 9，丙酮酸激酶XM＿026768580.1，柠檬酸合成酶XM＿001393946。参考其序列所设计的引物如表2所示。将上述发酵得到过滤的菌体进行黑曲霉总RNA的提取，然后根据TaKaRa公司的PrimeScriptTM II 1st Strand c DNA Synthesis Kit的操作方法进行反转录，实验操作按照产品说明书进行。PCR反应体系（25μL）:5?RT Reaction Buffer 5μL，dNTPs（25 mmol/L）1μL，RNase Inhibitor（25 U/μL）1μL，M-MLV RTase（200 U/μL）1μL，RNA 2μL，Random Primer（250 mmol/L）1μL，ddH2O 14μL。PCR反应条件：37°C 60 min；85°C 5 min；4°C保存。用Fast荧光定量PCR仪，采用2-ΔΔCt法进行相对定量分析。