《表1 逆转录及实时定量PCR所使用的引物》

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《双荧光素酶报告系统鉴定miR-204对水通道蛋白1基因的调控作用》

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转染48 h后采用RNAiso Plus试剂提取各组细胞总RNA，根据Stem-loop法采用Primer Premier5.0软件针对miR-204设计含有茎环结构（stemloop）的逆转录引物及定量PCR引物，如表1所示。PrimeScriptRT reagent Kit逆转录获得cDNA第一链，具体操作参照试剂盒使用说明。采用qRT-PCR反应试剂盒SYBR Premix EX TaqTMⅡ检测miR-204、AQP1的表达，以U6 snRNA、β-actin为内参照，所有反应均在ABI 7500定量PCR分析仪上进行。每个样本重复3个复孔，计算3个复孔的平均Ct值为最终Ct值，采用2-ΔΔCt法计算目的基因的相对含量[7-8]。