《表1 柠檬酸合酶基因克隆和敲除质粒构建所使用的引物》

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《黑曲霉菌株柠檬酸合成酶基因的敲除及功能分析》

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依据NCBI已经公布的CS（XM-001393946）的基因信息，设计cs基因序列引物如表1所示，以黑曲霉CGMCC10142菌株的基因组DNA为模板，通过PCR技术扩增编码柠檬酸合成酶基因cs。以提取的黑曲霉基因组为模板，CS-F、CS-R为上、下游引物。PCR反应体系（25μL）:r Taq DNA Polymerase（5 U/μL）1μL，上、下游引物（10μmol/L）各1μL，DNA 2μL，10?PCR Buffer 2.5μL，2.5?dNTP Mixture 2μL，ddH2O 15.5μL。PCR反应条件：95°C 5 min；95°C 30 s，60°C 30 s，72°C2 min，30个循环；72°C 10 min。将扩增的目的片段分别连接到pMD18-T载体上并测序。