《表1.本文所用到的质粒：新型酵母蛋白表位标记和基因敲除质粒系统的构建及可行性验证》

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《新型酵母蛋白表位标记和基因敲除质粒系统的构建及可行性验证》

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为了构建pCLHN-URA质粒，以质粒pUG72、pFA6a-MX6和酵母基因组为模板，利用Q5高保真DNA聚合酶，分别用引物UG-F（10μmol/L）和UG-R（10μmol/L）（表1） 扩增pUG72质粒的loxP-URA3-loxP等区域；用引物FA6A-F（10μmol/L）和FA6A-R（10μmol/L）（表1） 扩增质粒p FA6a的多酶切位点区域并在引物上添加Nhe I和Avr II酶切位点；用引物ADH1-F（10μmol/L）和ADH1-R（10μmol/L）扩增ADH1终止序列。同理，为了构建pCLHN-TRP质粒，以质粒pUG76、pFA6a-MX6和酵母基因组为模板，分别用引物UG-F（10μmol/L）和UG-R（10μmol/L）扩增pUG76的loxP-TRP1-loxP等区域（图1）。引物FA6A-F（10μmol/L）和FA6A-R（10μmol/L）（表1） 扩增质粒pFA6a-MX6的多酶切位点区域并在引物上添加Nhe I和Avr II酶切位点。用引物ADH1-F（10μmol/L）和ADH1-R（10μmol/L）扩增ADH1终止序列。将DNA片段重组后转化至DH5α感受态细胞，筛选出阳性克隆菌，进行菌落PCR验证，最后测序。