《表1 用于相关重组质粒构建所需引物》

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《基于Gluc的马源NLRP3炎症小体激活系统的建立》

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根据Gen Bank中eq IL-1β基因序列（D42147.1）、eq Caspase-1基因序列（NM＿001081842）、eq ASC基因序列（XM＿001500509.4）、eq NLRP3基因序列（XM＿005598741.3）），设计特异性引物（表1）。采用TRIzol试剂提取马组织的总RNA，经反转录制备c DNA，以c DNA为模板，利用引物IL-1β-F1/IL-1β-R1，扩增eq IL-1β目的基因。以此PCR产物为模板，利用引物IL-1β-F2/IL-1β-R2扩增eq IL-1βflag基因，经Not I和Xho I双酶切后克隆到p CAGGS载体中，构建重组质粒p CAGGS-eqIL-1β-flag。以真核表达质粒p CAGGS-eq IL-1β-flag为模板，利用引物p CAGGS-IL-1β-F/p CAGGS-IL-1β-R扩增线性p CAGGS-eq IL-1β-flag载体；以p MCS-Gaussia Luc质粒为模板，利用特异性引物GLuc-F/GLuc-R，扩增线性目的基因Gluc(Gaussia Luc），利用同源重组方法将目的基因Gluc克隆到p CAGGS-eq IL-1β-flag载体中，构建重组质粒p CAGGS-eq IL-1β-GLuc-flag。以p CAGGS载体为模板，利用引物caspp CAGGS-F/casp-p CAGGS-R扩增线性p CAGGS载体；以上述马组织的c DNA为模板，利用引物Casp-1-F/Casp-1-R扩增线性目的基因eq Caspase-1。利用同源重组方法将目的基因eq Caspase-1克隆到p CAGGS载体中，构建重组质粒p CAGGS-eq Caspase-1-HA。以上述马组织的c DNA为模板，利用引物ASC-F/ASC-R扩增eq ASC目的基因，经Hind III和Not I双酶切后克隆到pc DNA3.1-HA载体中，构建pc DNA3.1-eq ASC-HA质粒。以上述马组织的c DNA为模板，利用引物NLRP3-F/NLRP3-R扩增eq NLRP3目的基因，通过Hind III和Not I双酶切后克隆于pc DNA3.1-HA载体中，构建pc DNA3.1-eq NLRP3-HA质粒。