《表1 构建重组质粒所用引物》

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《嗜热酸性生淀粉α-淀粉酶Gt-amy中结构域C的环化重排及其对Gt-amy催化性能的影响》

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注:下划线部分为限制性酶切位点。

根据α-淀粉酶Gt-amy结构域C中作为环化重排突变位点的氨基酸位点设计引物T432-F1、T432-R1、D441-F1、D441-R1、P454-F1、P454-R1、G465-F1、G465-R1、A479-F1、A479-R1、S491-F1、S491-R1、S498-F1、S498-R1、G508-F1、G508-R1（表1），构建结构域C相关环化重排突变体DC-T432、DC-D441、DC-P454、DC-G465、DC-A479、DC-S491、DC-S498、DC-G508。以突变体DC-T432的构建为例，以重组质粒pSTOP1622-gtamy-DCh为模板，采用引物T432-F1和T432-R1，进行PCR扩增得到编码DC-T432的DNA片段。PCR扩增条件同1.3.2节。扩增产物经Bgl II和Sph I双酶切，连接至载体pSTOP1622，构建重组质粒pSTOP1622-gtamyDCT432h。将重组质粒送至上海生工生物工程股份有限公司进行测序，并与对应基因序列进行比对确认。