《表1 荧光定量PCR以及构建重组质粒的引物》

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《新城疫病毒对宿主核糖体蛋白RPL11降解机制的初步研究》

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注：下划线部分为酶切位点。

分别根据RPL11(001305188.1）和β-actin(L08165.1）的基因序列设计荧光定量PCR检测引物RPL11-F/R、β-actin-F/R（表1），引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。同时收集MOI 1的NDV感染8 h、16 h、24 h和32 h后和分别以MOI 1和0.1的NDV感染16 h和32 h后的细胞样品，经TRIzol提取各时间点的细胞总RNA，反转录合成c DNA，-20℃保存备用。采用SYBR q PCR Master Mix试剂盒，以引物RPL11-F/R和β-actin-F/R检测RPL11基因和β-actin的转录水平。反应条件：95℃2 min；95℃5 s、60℃10 s，72℃50 s，40个循环。最后以β-actin扩增值为参照，根据2-ΔΔCT方法，计算RPL11基因m RNA的相对转录水平。以未感染病毒的DF-1细胞作为对照。