《表2 3种NSP表达质粒构建用PCR亚克隆引物》

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《PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞后对Ⅲ型干扰素应答的调控》

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注:F为上游引物，R为下游引物，上游引物中下划线分别指示酶切位点与FLAG标签序列。Note:F is the upstream primer，R is the downstream primer，The underline in the upstream primer indicates the cleavage site and the FLAG tag sequence，respectively.

美洲型VR2332株（GenBank№KX767091）、美洲型HP-PRRSV GSWW/15株（GenBank№KX767091）、Marc-145细胞、PK-15细胞和pCDNA3.1（+）载体，兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室分离、保存；PAM细胞采集自SPF猪的肺脏，SPF猪，购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所SPF动物中心；人IFN-λ1和IFN-λ3蛋白，购自RD-systems公司；人IFN-β蛋白，购自Pepro Tech公司；辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗鼠IgG，购自康为世纪公司；IFN-λ3合成肽抗体，金斯瑞公司合成（GenBank NM-001166490.1）；Mouse IgG1negative control和Rabbit F（ab′）2anti-mouse IgG，购自AbD Serotec；RT-PCR试剂盒（Prime Script TMOne Step RT-PCR Kit）、反转录试剂盒（Prime Script TM RT Master Mix （Perfect Real Time）） 和荧光定量PCR试剂盒（SYBR\n\t\t\t\t\tPremix Ex TaqⅡ （TliRNaseH Plus）） ，购自宝生物工程（大连）有限公司；RNA提取试剂盒（RNeasy Plus Mini Kit）和RNase-Free DNase Set，购自Qiagen公司；实时荧光定量PCR仪（ABI 7500），购自Applied Biosystems公司；转染试剂盒（Lipofectamine3000Transfection Reagents），Thermo Fisher公司产品；本试验所用到的引物均由北京华大基因公司合成（表1和表2）。