《表1 表达载体元件PCR克隆用引物》

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《CRISPR/Cas9介导获得用于分离双峰驼iPSCs的转染细胞系》

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斜体:保护碱基；下划线:酶切位点；GFP:绿色荧光蛋白基因；Neo:新霉素抗性基因；下同Italics sections:Protective bases；Underlined sequences:Restriction enzyme sites；GFP:Green fluorescent protein gene；Neo:Neomycin resistance gene；The same below

构建表达载体所需要的元件有:上游同源臂（up）、eGFP、pgk-Neo、下游同源臂（down）。本实验以双峰驼血液全基因组为模板获得了含Nanog基因的DNA片段，该基因片段可作为克隆同源臂的模板。获得目的基因片段时所用引物见表1。PCR扩增体系（50μL）:200 ng/μL DNA模板1μL，上、下游引物（10μmol/L）各1.5μL，2×Mix 25μL，dd H2O21μL。含Nanog基因的DNA片段扩增条件:95℃预变性5 min；95℃变性20 s，56℃退火20 s，72℃延伸5 min，35个循环后，72℃延伸5 min，反应产物4℃保存。