《表1 PCR所用引物:花生AhFAD2-2基因的克隆与表达分析》

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《花生AhFAD2-2基因的克隆与表达分析》


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以花生根、茎、叶、花和不同发育时期种子,以及不同时段低温处理花生的叶片为材料,提取总RNA,并反转录合成c DNA第一条链,利用荧光定量PCR方法,以qRT-PCR-FAD2-2F1和qRT-PCR-FAD2-2R1为引物,以UBI2为内参基因(表1),反应体系采用Trans Start Green q PCR Super Mix UDG说明书中20μL体系,每个样品3个技术重复。利用ABI 7500 PCR仪,采用2步法进行。反应程序为:第一步95℃10 min;第二步95℃10 s,60℃30 s,40个循环。扩增曲线和Ct值由仪器自带软件自动生成。基因表达量的计算采用2-ΔΔCt方法进行。