《表2 Aj Akt基因克隆与表达分析所用的引物》

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《仿刺参Akt基因的克隆及其表达和生物功能分析》

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仿刺参组织的总RNA的提取以及c DNA第一链合成按照李莹莹等（2019）所述方法进行。利用Primer Premer 5.0软件，根据仿刺参转录组基因库中获取的目的基因的核心序列信息，设计Aj Akt的5'-RACE和3'-RACE的特异性引物（表2）。全长扩增按照李石磊等（2019）所述的方法和条件进行。扩增后的PCR产物经1.2%的琼脂糖凝胶电泳分离检测后，用DNA回收试剂盒（Axygen）纯化回收后连接到p MD18-T （Ta Ka Ra，日本）载体上，转化至E.coli DH5α感受态细胞，涂LB平板后过夜培养，挑取平板上8～10个单菌落，分别接种到1 m L LB液体培养基中（含1μL 100μg/μL Amp），37℃，振荡培养4 h。用1μL菌液做模板，进行菌落PCR鉴定（10μL体系）（李石磊等，2019）。选取阳性克隆交由生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序。