《表1 同源重组法构建重组质粒的引物》

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《G1-like与F/98-like进化谱系的P B2、M基因在H5N6亚型禽流感病毒重配中的竞争优势研究》

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注：同源臂用下划线表示。Note:Homologous arms are underlined.

分别提取MZ34、YB0597、JT131的总RNA并反转录得到各自的cDNA，利用高保真DNA聚合酶和表1的克隆引物扩增病毒各基因节段，回收扩增产物。按同源重组试剂盒说明书，将回收的目的片段与经Bsm BⅠ酶切后的线性载体p HW2000连接转化后，分别提取疑似阳性质粒进行酶切和测序验证，最后分别构建MZ34株8个基因的重组质粒（MZ34-PB2、MZ34-PB1、MZ34-PA、MZ34-HA、MZ34-NP、MZ34-NA、MZ34-M、MZ34-NS）、YB0597株的PB2和M质粒（YB0597-PB2、YB0597-M）以及JT131株的M质粒（JT131-M），共计构建11个重组质粒，各重组质粒均经酶切和测序鉴定。