《表1 本研究所用引物：双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体》

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《双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体》

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小写碱基代表2个插入片段之间或插入片段与载体之间重叠的序列。

用闭合环状的p UC–Δ0340＿0341质粒DNA直接转化T.thermophilus细胞，将转化混合物稀释106倍后，取200μL涂布于不含筛选物质的TB培养平板上；从平板中随机挑选300个单菌落，通过混合池菌落PCR方法（10个菌落/池）筛选出含有Δ0340＿0341等位基因的菌落池，从中鉴定出含有Δ0340＿0341等位基因的菌落。采用普通PCR及Southern杂交验证该菌落的基因型，得到Δ0340＿0341突变株。PCR和Southern杂交所用到的引物见表1，其中，PCR用的引物位于TTC0340＿0341基因两侧DNA序列中，Southern杂交方法如1.2.2介绍，采用Sac II对菌株基因组DNA迚行酶切。