《表3 本研究所用引物：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制水稻光敏色素PHYB基因突变体》

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《利用CRISPR/Cas9基因编辑技术创制水稻光敏色素PHYB基因突变体》

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取靶序列引物g RNA-F和g RNA-R各10μL，于PCR仪以程序:65℃，5 min；0.1℃/s降温至20℃，退火获得靶位点特异片段。用限制性内切酶BsaⅠ使载体pBUN411线性化，纯化回收，经T4连接酶将PHYB靶位点特异片段连接至线性化载体pBUN411。连接产物由热激法转入大肠杆菌DH5α，挑取单克隆，通过菌落PCR检测引物（表3）对其进行扩增，并测序验证。将阳性质粒转化农杆菌EHA105，以抗除草剂基因引物（Bar-F和Bar-R）（表3） 鉴定阳性转基因苗。