《表1 实验所用引物：基于CRISPR/Cas9技术的水稻OsDUF1475突变体的创建与分析》

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《基于CRISPR/Cas9技术的水稻OsDUF1475突变体的创建与分析》

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以OsDUF1475基因组序列为参考，设计CRIS-PR/Cas9特异性检测引物，正反向引物分别位于靶点序列上下游250 bp左右。由于2个靶点位置接近，因此设计同一对引物CT-F/R（表1）进行检测。以转基因植株基因组DNA为模板，20μL PCR反应体系和反应程序同1.3（退火温度为52℃）。以琼脂糖凝胶电泳进行检测，并将PCR产物送中美泰和生物技术（北京）有限公司测序。对于测序结果，利用BioXM2.6软件和基于简并序列解码法（degenerate sequence decoding，DSD）原理开发的在线解码工具DSDecode（http://dsdecode.Scgene.com/）进行分析，从而确定转基因植株的突变情况。