《表1 所用引物：利用CRISPR/Cas9技术构建拟南芥IQM家族基因四突变体》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《利用CRISPR/Cas9技术构建拟南芥IQM家族基因四突变体》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

参照Ma和Liu（2016）的CRISPR/Cas9基因编辑技术进行。首先，在IQM1至IQM4的基因组序列中设计4对靶点接头（表1），分别退火连成小片段，同源重组入经BsaI线性化的载体pYLsgRNA-AtU3d/LacZ和pYLsgRNA-AtU3b中，然后，进行gRNA表达盒扩增，回收预期扩增产物，连接进双元载体并转化大肠杆菌；继而，进行转化菌落PCR鉴定，选择阳性克隆测序验证；进一步，将验证正确的质粒转化农杆菌，并用菌落PCR鉴定得到转化农杆菌；再进一步，通过农杆菌蘸染花蕾法转化野生型拟南芥，收获种子并在含有卡拉霉素（Kan）的培养基上筛选出抗性植株即候选T0代编辑植株；最后，用靶点上、下游引物（表1）对候选株系进行PCR扩增，将产物测序，选出双链都成功编辑的转基因植株留种，供纯合子筛选。