《表2 PCR引物序列：利用CRISPR/Cas9慢病毒载体构建敲除大鼠肝星状细胞COX-2基因的细胞模型》

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《利用CRISPR/Cas9慢病毒载体构建敲除大鼠肝星状细胞COX-2基因的细胞模型》

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（1）混合细胞克隆pool检测:（1）提取各基因组DNA；（2）PCR引物设计，按照引物设计通用原则，由上海吉凯公司设计合成（表2）；（3）按比例配置反应体系，PCR反应程序反应后获得杂交DNA产物；（4）PCR结束后，取3μl进行电泳检测。（2） Cruiser酶切检测:在灭菌PCR管中配制PCR产物2～3μl、Detecase Buffer 2μl、Detecase 1μl、dd H2O至10μl，45℃反应20 min后，立即向上述10μl体系内加入2μl终止液（Stop Buffer），然后进行2%琼脂糖凝胶电泳检测。（3）蛋白水平检测:（1）蛋白抽提；（2）SDS-PAGE；（3）免疫印迹（湿转）；（4）抗体杂交；（5）X光显影。