《表1 PCR引物序列：Sirt3基因RNA干扰慢病毒载体及稳定表达的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的构建》

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《Sirt3基因RNA干扰慢病毒载体及稳定表达的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的构建》

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根据以上设计的靶序列，首先合成含各干扰序列及阴性对照的单链DNA oligo（见表1），然后退火配对产生双链DNA，再通过T4连接酶将DNA片段与经过Age I和EcoRI双酶切后的GV248线性化载体（h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin）在适当的缓冲液中进行连接；将连接产物转入制备好的细菌感受态细胞，PCR鉴定阳性重组子，利用质粒试剂盒提取质粒，然后送DNA测序分析进行验证。