《表5 验证引物序列:基于CRISPR/Cas9构建小鼠UOX基因敲除模型》

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《基于CRISPR/Cas9构建小鼠UOX基因敲除模型》


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代孕母鼠3周后生产F0代小鼠。出生后3周雄性和雌性F0代小鼠分开饲养。取出生后3周F0代小鼠尾尖血,用DNeasy blood and tissue kit提取基因组DNA,PCR验证基因敲除情况,验证序列见表5,PCR扩增体系见表6。PCR反应条件为95℃预变性5 min;按循环程序(95℃30 s,60℃30 s,68℃40 s)进行30个循环;68℃延伸5 min。用QIAQuick PCR purification kit纯化PCR产物,用TA Cloning kit克隆,反应产物测序。