《表1 sgRNA序列：利用CRISPR/Cas9技术建立敲除JAK2基因K562细胞系》

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《利用CRISPR/Cas9技术建立敲除JAK2基因K562细胞系》

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K562是悬浮细胞，普通化学药物转染效率非常低下，本实验前期使用阳离子脂质体法转染质粒到K562细胞，Chemfect介导转染同张锋实验室设计的携带Cas9和GFP的pX458质粒，48h后如图2所示，荧光阳性率极低。本实验采用慢病毒递送基因编辑系统具有更高转导效率，如图3所示，在加嘌呤霉素后第2～9天，在100μl毒液范围内，细胞存活率与毒液体积相关，100μl毒液组细胞存活率最高，200μl存活率骤降。表明在100μl毒液时随着感染复数（multiplicity of infection，MOI）值增大，感染效率增高，200μl病毒则产生较强细胞毒性。以细胞生存率高、生长状态良好、背景干净为标准，在本实验方案中，得到100μl毒液组为慢病毒感染K562细胞系最优病毒量。