《表3 sgRNA序列：应用CRISPR/Cas9技术建立IGF-ⅡR基因定点整合的SKBR3细胞系》

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《应用CRISPR/Cas9技术建立IGF-ⅡR基因定点整合的SKBR3细胞系》

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以SKBR3基因组为模板扩增靶序列AAVS1，条带大小为634 bp（图2A）。经测序鉴定，确认与GenBank中的参考序列一致，因此可根据此序列设计sgRNA。基于sgRNA的设计原则，针对AAVS1基因序列设计了6个长20 bp的sgRNA（表3），分别与pCS质粒载体连接，经测序确认构建成作用于AAVS1基因靶序列的Cas9/sgRNA质粒。用UCA CRISPR/Cas9活性检测试剂盒检测sgRNA活性，显示sgRNA2效率最高（图2B）。