《表2 引物序列:乳腺癌细胞QSOX1的CRISPR/Cas9基因编辑及其对增殖侵袭的影响研究》

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《乳腺癌细胞QSOX1的CRISPR/Cas9基因编辑及其对增殖侵袭的影响研究》


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p X459-QSOX1-sgRNA载体转染48h后,用Quick Extract DNA Extraction Solution试剂盒提取MCF-7细胞基因组DNA。利用表2引物对sgRNA的基因片段进行PCR扩增。PCR产物经变性复性,再用T7E1酶酶切15min,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,经Image J软件分析灰度值,计算sgRNA的基因敲除效率。计算公式Indel(%)={1-[1-(b+c)/(a+b+c)]1/2}×100%,其中a为目的条带,b和c为切割后形成的两条DNA带[28]。