《表1 sgRNA序列：利用CRISPR/Cas9技术敲除长非编码RNA SNHG16基因促进K562细胞CD235a的表达上调》

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《利用CRISPR/Cas9技术敲除长非编码RNA SNHG16基因促进K562细胞CD235a的表达上调》

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使用sgRNA设计网站http://crispr.mit.edu，分别针对SNHG16 5′端和3′端设计sg RNA，由于SNHG16Exon4的3′端与其他基因存在重合，因此只能在Exon4上与该基因不重合的部分设计3′端sg RNA。输入目的序列后，根据结果在基因5′端和3′端各挑选两个评分在75分以上的sg RNA，命名为5′-sg1、5′-sg2、3′-sg1、3′-sg2，由于载体使用限制性内切酶Bsmb I进行酶切，需要在sg RNA的5′端添加CACC，在互补链的5′端添加AAAC，最终获得的sg RNA序列如下，见表1。