《表1 实验所用引物：拟南芥雄性不育突变体ms1424的鉴定与基因定位》

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《拟南芥雄性不育突变体ms1424的鉴定与基因定位》

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“-”代表不适用，“N”表示有多种不同大小的PCR产物，“117 （Nde I）”为CAPS分子标记的PCR扩增产物，可被Nde I酶切成两段。

本文共涉及五种拟南芥[Arabidopsis thaliana（L.） Heynh.]材料:Columbia-0（Col-0)生态型和Landsberg erecta （Ler）生态型的野生型材料，背景为Ler生态型的ms1424和背景为Wassilewskija （Ws）生态型的cer1-6 （SALK＿008544）突变体，以及ms1424和Col-0的杂交F2代分离出的ms1424。cer1-6购自ABRC，其余材料皆为本实验室所留存。如无特殊说明，则所有拟南芥均生长在相对湿度（relative humidity，RH）50%～70%、温度20～22°C的温室中，每日给予16 h光照。卡诺固定液:冰醋酸和无水乙醇按体积比1:3配制。亚历山大红染液参照Peterson等(2010）配制而成。体内萌发所用试剂同Di Giorgio等（2016），体外花粉萌发培养基的配置参照文献（Boavida和Mc Cormick 2007）。DNA提取用CTAB，2×CTAB缓冲液:20 g·L-1 CTAB，75 mmol·L-1 TrisHCl，15 mmol·L-1 EDTA，1.05 mmol·L-1 Na Cl。总RNA提取试剂:TRIzol （Invitrogen）。c DNA第一链合成:Prime ScriptTM RT reagent Kit with g DNA Eraser （Takara）。DNA聚合酶:2×Taq DNA polymerase （Novoprotein）。实验涉及的引物见表1。Nde I购自NEB。凝胶回收:Axy Prep DNA凝胶回收试剂盒。连接载体:天根生化科技有限公司的p GM-T、VT202-01。T-DNA插入突变体引物序列:SALK T-DNA primer design；CER1同源基因和CER1同源蛋白信息:Phyto Mine、NCBI、Ensembl Plants和Tair；同源蛋白序列相似性对比:NCBI Blast。系统进化树用MEGA的10.0.5版本计算得出，alignment为Clustal W，系统进化树为Maximum Likelihood Tree，Test of Phylogeny选择Bootstrap method，Replications为1 000次，其余为默认参数。