《表1 实验所用引物：利用CRISPR/Cas9技术构建表达鲤长链脂肪酸延长酶5基因(Elovl5)的转基因斑马鱼》

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《利用CRISPR/Cas9技术构建表达鲤长链脂肪酸延长酶5基因(Elovl5)的转基因斑马鱼》

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*下划线部分为酶切位点，粗体部分为同源重组臂序列

参照刘斐斐等（2017）方法，选择靶位点和单链指导RNA （single guide RNA，sg RNA）。靶位点位于斑马鱼基因组（Gen Bank No.GCF＿000002035.6）第5号染色体47455382～47456382处，为基因间区。设计T7-thg RN-F （表1）中的TGTAATACGACTCAC-TAT为T7启动子，TACTCAACACTGGTG为g RNA。以sg RNA DNA质粒（Vejnar et al.，2016）为模板，PCR扩增，以扩增sg RNA模板的3'端。PCR反应体系和大部分反应条件同1.2.1的方法，退火温度设定为58℃，退火30 s。扩增产物为T7启动子-sg RNA-trac结构。产物经过PCR纯化后，用MAXIscript T7 kit （Thermofisher，美国）进行转录。用苯酚/氯仿/异戊醇法纯化sg RNA，溶解于无核酸酶水，放入-80℃备用。