《表1 本研究所用引物：异色瓢虫nAChRα6基因的敲除及其对杀虫剂敏感性的影响》

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《异色瓢虫nAChRα6基因的敲除及其对杀虫剂敏感性的影响》

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随机选取异色瓢虫CAU-S品系3龄幼虫5头，采用TRIzolTMRNA提取试剂盒参照说明书提取其mRNA，并利用M-MLV反转录试剂盒将m RNA反转录合成cDNA，于-80℃保存备用。根据GenBank数据库下载的昆虫nAChRα6基因mRNA序列，在其保守区域设计4对简并引物（表1），用于扩增异色瓢虫nAChRα6相互重叠的4个cDNA片段，所有引物均由苏州金唯智生物科技有限公司合成。25μL PCR反应体系：2×Taq Master Mix 12.5μL、ddH2O9.5μL、上下游引物各1μL、cDNA模板1μL。反应条件：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃再延伸7 min，4℃保存。将PCR扩增产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳进行检测，获得的目的产物送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。将测序所得序列进行BLAST比对分析，从GenBank数据库下载赤拟谷盗（登录号ACM09859.1）、马铃薯甲虫Leptinotarsa decemlineata（登录号AJZ68868.1）、黑腹果蝇（登录号AAM13393.1）、西花蓟马（登录号AOT81842.1）和小菜蛾（登录号AMH87607.1）的nAChRα6编码氨基酸序列，利用Geneious 9.1.4软件对测序所得nAChRα6部分序列与GenBank数据库下载的相关序列进行多序列比对，并对其编码的蛋白结构域进行预测。