《表1 鲤Pgr1和Pgr2RACE扩增以及实时荧光定量PCR引物》

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《鲤两种孕激素受体基因克隆、表达及比较分析》

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用Blastx将斑马鱼（Danio rerio) Pgr蛋白（GenBank号：NP＿001159807.1）比对到鲤基因组和预测基因集（GenBank号：GCA＿000951615.2）上，获得2种Pgr mRNA (GenBank号：XM＿019123336.1和XM＿019122667.1）。这两种基因分别位于鲤36号染色体和35号染色体。以这两条m RNA为参考，分别设计5'RACE引物和3'RACE引物（表1）。以卵巢总RNA为模板，按照SMARTer RACE 5'/3'Kit试剂盒（Clontech，日本）方法分别获得2种基因5'RACE产物。按照3'Full RACE Core Set with PrimeScriptTM RTase试剂盒（TaKaRa，日本）获得3'RACE产物。将产物连接到pEASY-T3载体，转染到Trans1-T1，在LB培养基中筛选阳性克隆。对单克隆进行菌落PCR，产物送至上海生工测序。测序产物与上述mRNA拼接，获得cDNA全长序列。