《表2 实时荧光定量PCR引物》

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《柑橘溃疡病抗性SNP验证及其相关钙依赖性蛋白激酶基因诱导表达》

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以柑橘溃疡病敏感品种‘冰糖橙’、中抗品种‘新生系3号椪柑’和高抗品种‘金弹’为试材，每个品种选3株树，分别从每株的树冠外围选取24片完全展开且成熟度一致的春梢叶片混合为1个样品，设置3个生物学重复。叶片清洗干净后用75%酒精进行表面消毒，无菌水清洗3次，置于无菌培养皿中；用注射器将105 cfu/mL的溃疡病菌悬液注射入叶片下表皮，每个样品均处理18片叶；用浸有10μmol·L-1水杨酸（SA）溶液、100μmol·L-1茉莉酸甲酯（Me JA）溶液和100μmol·L-1脱落酸（ABA）溶液的无菌脱脂棉覆盖不同品种叶片的叶柄部位。分别在处理后0、6、12、24、48、72 h从4种处理的样品中随机选取3片叶用刀片将处理部位切取下来混合，以无菌水处理的各品种为对照。用EASY spin植物RNA快速提取试剂盒（购自北京艾德莱公司）提取总RNA[22]，Prime ScriptTM RT reagent Kit反转录试剂盒（Ta KaRa公司）将RNA反转录成c DNA。特异性扩增引物（表2）由英维捷基（上海）贸易有限公司合成。以actin为内参基因，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR）技术分析Cs CDPK的相对表达量。采用20μL反应体系：10μL 2×SYBRG PCR Master Mix，5μL cDNA，各0.5μL 10 mmol·L-1引物，4μL H2O。扩增反应在7500 Fast Real-Time PCR System(Applied Biosystem）上进行，反应程序：95℃10min；95℃15 s；60℃1 min；共40个循环。