《表1 用于构建载体、验证及定量PCR的引物》

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《梯棱羊肚菌镉胁迫响应基因ATX1功能分析》

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注：引物序列中小写字母为同源臂序列

将梯棱羊肚菌单孢菌株A50在CYM培养基上活化后，转接到分别添加0mg/L、3mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L CdCl2的CYM培养基上，22℃恒温培养7d，收集菌丝（吕首云2019）。采用RNAiso Plus试剂盒抽提不同镉浓度处理的梯棱羊肚菌菌丝体的RNA，使用HiScript II One Step RT-PCR Kit（Vazyme）进行RNA反转录。以得到的cDNA为模板，以q-ATX1-F/R、q-Ccc2-F/R，q-hmt-F/R为引物（表1），以ATU1为内参基因（Zhang et al.2018），以不添加CdCl2的处理为对照，采用实时荧光定量PCR(RT-PCR）技术分别检测不同浓度镉胁迫下梯棱羊肚菌各侯选基因ATX1、Ccc2和hmt的相对表达量（吕首云2019）。RT-PCR采用AceQTM qPCR SYBR Green Master Mix(TaKaRa，Japan）在CFX Connect Real-Time PCR System(USA）中按照Vazyme的qPCR实验操作手册进行。反应体系（10μL）:AceQTM qPCR SYBR Green Master Mix 5μL，引物（10μmol/L）各0.5μL，cDNA（15ng）0.5μL，ddH2O3.5μL。反应参数：95℃预变性5min，95℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，40个循环（吕首云2019）。