《表1 引物序列：烟草NtNHX2基因的克隆及不同逆境下表达模式分析》

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《烟草NtNHX2基因的克隆及不同逆境下表达模式分析》

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参考GenBank收录的烟草NtNHX2基因序列（LOC107808863），用DNAMAN软件设计出引物NtN-HX2-F、NtNHX2-R（表1）。用Trizol试剂提取烟草幼苗的总RNA，通过cDNA合成试剂盒逆转录成c D NA后进行PCR扩增（反应程序:95℃预变性5 min；95℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，34个循环；72℃延伸8 min）。使用DNA凝胶纯化回收试剂盒纯化目的片段，并在16℃条件下与pMD19-T载体连接过夜，将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态，然后将感受态细胞接种在含氨苄青霉素（Amp）的LB固体培养基上，37℃过夜倒置培养。用牙签挑取少量菌落用于PCR检测，筛选阳性克隆送至上海生工生物工程有限公司进行测序。